多元醇類凍干保護(hù)劑包括甘油、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、木糖醇、叔丁醇、側(cè)金盞花醇等,這一類凍干保護(hù)劑是比較常用較為普遍的凍干保護(hù)劑。以甘油作為凍干保護(hù)劑來(lái)介紹一下在蛋白質(zhì)凍干中的作用。甘油具有良好的滲透能力,可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部和胞內(nèi)大分子形成氫鍵以取代干燥脫除的水分,從而維持蛋白質(zhì)、碳水化合物及脂肪等大分子活性物質(zhì)的原有結(jié)構(gòu)。此外,甘油還可以起到降低細(xì)胞脫水皺縮和緩解復(fù)水腫脹的效果。另外醇和糖類相似均具有醇和糖類羥基官能團(tuán),均能產(chǎn)生“優(yōu)先水化作用”以及改變體系的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)變溫度等,故在發(fā)揮保護(hù)效果方面和糖類具有一定共性。須知蛋白在使用時(shí)候存在凍融情況下建議可以選甘露醇、右旋糖酐40、蔗糖,另外40%-50%的甘油效果也很好。
PCR試劑凍干示例:
(1)將熒光PCR擴(kuò)增緩沖液、引物、探針、熱啟動(dòng)Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、凍干保護(hù)劑按照配方進(jìn)行混合;
(2)凍干保護(hù)劑可選用:甘油、海藻糖、蔗糖、甘露醇、PEG、PVP、DTT、牛血清白蛋白、吐溫100、甲酰胺、氨基酸等。
(3)將上述混合液灌裝至PCR擴(kuò)增管或者八聯(lián)管中。
(4)進(jìn)行凍干。(5)出倉(cāng)進(jìn)行測(cè)試。(6)配方修正。
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