熒光PCR之探針法 2020-07-28

熒光PCR的探針法分為全基因組核酸探針、克隆探針、寡核苷酸探針、單鏈RNA探針、cDNA探針、蛋白質探針以及酶探針。帶大家一起了解下寡核苷酸探針、cDNA探針、RNA探針的特點。寡核苷酸探針特異性較高，區(qū)別染色體上一個堿基的突變；由于其鏈短，分子量小，雜交時間較短（僅需1-2小時），可預測雜交條件，可直接利用DNA序列人工合成獲得特異片段而無需分子克隆，獲得探針相對容易。但是由于其鏈短致使標記率較低，也影響了檢測的敏感性，僅能檢出含很少的標本。cDNA探針以RNA為模板，用反... 查看更多
熒光PCR凍干之DMSO 2020-07-27

二甲基亞砜（DMSO）是一種有機化合物，常溫下為無色無臭的透明液體，是一種吸濕性的可燃液體。具有高沸點、熱穩(wěn)定性好、與水混溶的特性?？勺饔袡C溶劑、反應介質和有機合成中間體。也可用作合成纖維的染色溶劑、去染劑、染色載體,以及回收乙炔、二氧化硫的吸收劑。二甲基亞砜是一種既溶于水又溶于有機溶劑。廣泛用作溶劑和反應試劑，具有很高的選擇抽提能力。二甲基亞砜是如何應用的呢？下面簡單介紹下，DMSO是一種重要的滲透型細胞保護劑。培養(yǎng)液中DMSO濃度為10%時，細胞生長抑制率近100%；1‰... 查看更多
熒光PCR凍干保護劑之甲酰胺 2020-07-26

甲酰胺是一種化合物，無色透明液體，略有氨味，是合成醫(yī)藥、香料、染料等的原料，也可作為溶劑用于合成纖維的抽絲、塑料加工、木質酪素墨水的生產(chǎn)等。通過甲酸甲酯和氨的反應制備甲酰胺的方法。甲酰胺是可作為溶劑、有機合成原料、醫(yī)藥原料等的在工業(yè)上有用的物質。甲酰胺是被較早發(fā)現(xiàn)并應用的PCR凍干保護劑之一，能促進引物模板退火，能提高PCR反應的特異性。分享下熒光PCR試劑凍干的示例：(1)將熒光PCR擴增緩沖液、引物、探針、熱啟動Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、... 查看更多
熒光PCR凍干之PVP 2020-07-25

聚乙烯吡咯烷酮簡稱PVP,是一種非離子型高分子化合物，是N-乙烯基酰胺類聚合物中被研究得深、廣泛的精細化學品品種。應用于醫(yī)藥、化妝品、食品等行業(yè)?？勺稣澈蟿?、增溶劑、分散或共研磨劑、活性成分穩(wěn)定劑等。PVP按其平均分子量大小分為四級，用K值表示，K值實際上是與PVP水溶液的相對粘度有關的特征值，而粘度又是與高聚物分子量有關的物理量，一般K值越大，其粘度越大，粘接性越強。熒光PCR凍干時，PVP能夠增強PCR產(chǎn)物生成量，其中PVP也能有效提高PCR效率和特異性。PVP作為PCR... 查看更多
熒光PCR凍干保護劑之蔗糖 2020-07-24

蔗糖是由葡萄糖和果糖通過異構體羥基縮合而成的非還原性二糖。蔗糖極易溶于水其溶解度隨著溫度的升高而增大。蔗糖的化學性質穩(wěn)定，多呈無定型結構，對阻止蛋白質二級結構改變、凍干處理過程中，貯藏期內(nèi)蛋白質的伸展和聚集起重要的作用。糖對蛋白質保護作用大小有時和其濃度有關，通常在某個濃度范圍內(nèi)糖的保護作用隨著濃度的升高而增大；當達到某一濃度時保護作用達到大值，而此后再增大糖的濃度則保護效果不再顯著增加，有時反而會降低。在凍干時，其中蔗糖海藻糖等雙糖對一些蛋白質均能顯示出良好的保護作用，具備... 查看更多
熒光PCR凍干保護劑之海藻糖 2020-07-23

海藻糖又稱漏蘆糖、蕈糖等，是一種通過生物發(fā)酵技術從玉米、木薯等淀粉獲得的安全、可靠的天然糖類。海藻糖在食品以及醫(yī)藥生物制品方面等廣泛應用。海藻糖是怎么應用的呢？在食品中作為添加劑來改善干燥食品的質量和風味。在醫(yī)藥生物制品方面海藻糖因其具有高玻璃化轉變溫度和低吸濕性等特性，對實現(xiàn)蛋白等生物藥品的玻璃化凍結起重要作用，既是有效的低溫保護劑又是很好的凍干保護劑。海藻糖作為熒光PCR凍干保護劑的其中一種，在凍干中的應用：既能在冷凍過程中充當?shù)蜏乇Ｗo劑，又能在干燥脫水過程中起到脫水保護... 查看更多
熒光定量PCR的優(yōu)點 2020-07-21

普及一下熒光定量PCR的幾個優(yōu)點：1、使用特異性探針對定量分子進行識別，具有很高的準確性。同時靶序列由引物和探針雙重控制，特異性好、假陽性低。2、熒光PCR檢測技術是綜合了PCR技術、熒光標記技術、激光技術、數(shù)碼顯象技術為一體的技術，因此檢測靈敏度高。3、熒光信號的產(chǎn)生和每次擴增產(chǎn)物成一一對應的關系，通過熒光信號的檢測可以直接對產(chǎn)物進行定量；定量范圍可在0－1010拷貝/毫升。4、擴增和檢測可以在同一管內(nèi)檢測，一步完成，不需要開蓋，不易污染。5、速度快、高通量，可在2－3小時... 查看更多
熒光PCR凍干保護劑-叔丁醇 2020-07-19

叔丁醇被大家認為是適合制劑的凍干溶劑。有如下特點：凝固點高，純的叔丁醇在室溫下（25℃）就可以凍結。叔丁醇的蒸汽壓較高有利于升華，節(jié)省凍干時間。叔丁醇毒性低，在凍干過程中，大部分叔丁醇可在一次干燥階段升華，在制劑中殘留量很低。叔丁醇自身在凍結中形成針狀結晶，能改變?nèi)苜|的結晶方式，利于升華。叔丁醇也可在熒光PCR試劑當凍干保護劑使用。叔丁醇起到加快凍干進程和改善凍干微觀結構的作用。凍干前的熒光PCR反應混合物原液中的濃度范圍為：叔丁醇的濃度為10%-40%（v/v）。熒光PCR... 查看更多

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